انتقال ژن به گونه های قارچ colletotrichum با استفاده از آگروباکتریوم تومیفشینس
پایان نامه
- وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه بوعلی سینا - دانشکده علوم کشاورزی
- نویسنده مهسا یوسفی پور حقیقی
- استاد راهنما [جلال سلطانی
- سال انتشار 1390
چکیده
قارچ ها در طبیعت به دلیل تولید آنزیم ها و متابولیت های اولیه و ثانویه ی بسیار مهم شان از موجودات بسیار مهم و پرکاربرد در صنعت، پزشکی و کشاورزی هستند. قارچ ها با روش های مختلف بیوتکنولوژیکی تحت دستورزی ژنتیکی قرار گرفته اند. بهترین روش توصیه شده برای دستورزی ژنتیکی قارچ ها روش انتقال ژن به واسطه آگروباکتریوم تومیفشینس شناخته شده است. قارچ کولتوتریکوم گلوسپوریویدس قارچی ملانکونیال و ریسه ای که به عنوان قارچ مولد تاکسول معرفی شده است.نخست, برای داشتن حداکثر میزان کنیدی در کمترین زمان جهت آزمایشات تراریختی این قارچ تحت تیمار های نوری، دمایی و محیط کشت قرار گرفت. در نتیجه این آزمایشات بهترین شرایط برای کنیدی زایی قارچ ترکیب محیط سیب زمینی دکستروز آگار و کاغذ فابریانو در دمای 25-30 درجه سانتی گراد و 16 ساعت روشنایی و 8 ساعت تاریکی بدست آمد و پس از 15 روز غلظت کنیدیایی حدود 105 کنیدی بر میلی لیتر را تولید کرد و پس از 30 روز غلظت کنیدیایی آن به 108 کنیدی بر میلی لیتر رسید. سپس قارچ مذکور به جهت بررسی میزان تراریختی و بررسی شرایط بهینه برای داشتن حداکثر تراریخت توسط آگروباکتریوم تومیفشینس سویه psdm دارای ژن گزینش گر مقاومت به هیگرومایسین b( hph )و سویه آگروباکتریوم تومیفشینس bs.y90 حاوی ژن گزارش گرپروتئین فلورسنت سبز( gfp) تحت دستورزی ژنتیکی قرار گرفت.نتایج بدست آمده بیانگر آنند که برایداشتن حداکثر تراریختی در این قارچ بهترین شرایط ترکیب شرایط 3 روز هم کشتی و غلظت کنیدیایی 107 کنیدی بر میلی لیتر و استفاده از فیلتر هم کشتی فابریانو برای هر دو تراژن بود. به طور کلی استفاده از فیلتر های حاوی نایلون برای ژن غیر فلورسنت hph مناسب تر بود وباعث تراریختی بیشتری شد.نتایج انتقال ژن و بیان پایدار تراژن ها با استفاده از کشت متوالی در محیط های غربال, واکنش زنجیره ای پلیمراز و فلورسنس میکروسکوپی به تایید رسید. قارچهای تراریخت حاصله از نظر فنوتیپ رویشی نیز تفاوتهای آشکار با والد تیپ وحشی خود نشان دادند.همچنین ژنوم این قارچ جهت تشخیص حضور ژنهای مسیر بیوسنتز تاکسول برای دو ژن انتهایی این مسیر بنام های dbat و bapt توسط pcr بررسی شد باند مربوط به ژن dbat مشاهده شد اما باند مربوط به bapt مشاهده نشد و hplc وجود ماده تاکسول را در عصاره متانولی خارج سلولی قارچ کشت شده در محیط کشت مایع pdb تایید نکرد
منابع مشابه
بهینه سازی کشت بافت و انتقال ژن GUS به موسیر با استفاده از آگروباکتریوم
موسیر (Allium stipitatum) یک سبزی خوراکی بوده و از خصوصیات دارویی بسیار مهمی برخوردار است. بنابراین بهینهسازی یک سیستم باززایی و تراریزش کارآمد در این گیاه جهت بهبود و اصلاح آن از طریق مهندسی ژنتیک ضروری است. دراین مطالعه، ریزنمونههای جنین، طبق پیاز و ریشه درون شیشهای موسیر درمحیط کشت MS حاوی غلظتهای مختلفی از تنظیم کنندههای رشد NAA، 2,4-D و BA بهمنظور القاء کالوس و باززایی کشت شدند. ریزن...
متن کاملبهینه سازی انتقال ژن به جو و تولید گیاهان تراریخته بارور با استفاده از آگروباکتریوم
در سالهای اخیر انتقال ژن به غلات به ابزار مهمی برای بهبود صفات زراعی گیاهان تبدیل شده است. جو یکی از با اهمیت ترین غلات دانه ای است که اصلاح آن برای افزایش تحمل به تنشهای زیستی و غیرزیستی از طریق انتقال ژن همانند سایر گیاهان زراعی از اهمیت زیادی برخوردار است. بهینه سازی عوامل مختلف موثر در تراریزش و باززایی گیاهان تراریخته اولین قدم در برنامه های انتقال ژن به گیاهان محسوب میشود. در این پ...
متن کاملبهینه سازی کشت بافت و انتقال ژن gus به موسیر با استفاده از آگروباکتریوم
موسیر (allium stipitatum) یک سبزی خوراکی بوده و از خصوصیات دارویی بسیار مهمی برخوردار است. بنابراین بهینهسازی یک سیستم باززایی و تراریزش کارآمد در این گیاه جهت بهبود و اصلاح آن از طریق مهندسی ژنتیک ضروری است. دراین مطالعه، ریزنمونههای جنین، طبق پیاز و ریشه درون شیشهای موسیر درمحیط کشت ms حاوی غلظتهای مختلفی از تنظیم کنندههای رشد naa، 2,4-d و ba بهمنظور القاء کالوس و باززایی کشت شدند. ریزن...
متن کاملبررسی انتقال ژن cry1ab به ژنوم کلزا با استفاده از آگروباکتریوم
چکیده کلزا ((brassica napus l. یکی از گیاهان دانه روغنی محسوب می شود که پس از سویا و خرما، سومین مقام تولید روغن در جهان را به خود اختصاص داده است. این گیاه توسط برخی از آفات راسته بال پولک داران به طور جدی مورد حمله قرار گرفته و موجب افت شدید کمیت و کیفیت محصول آن می شود. با انتقال ژن cry1ab (کد کننده پروتئین سمی برای حشرات راسته بال پولک داران) به گیاه کلزا، می توان مقاومت آن را در برابر حشر...
15 صفحه اولبهینه سازی انتقال ژن به ریشه های مویین گیاه شیرین بیان با استفاده از آگروباکتریوم ریزوژنز حامل ژن گزارشگر gus
شیرین بیان یکی از گیاهان دارویی مهم در جهان است. ریشه شیرین بیـان حاوی ساپونین تـری ترپن های فعـال می باشد. گلیسیریزین و محصولات هیدرولیز آن، اهمیت زیادی در صنعت دارویی و محصـولات غذایـی دارند. بسیـاری از گونـه هـای گیـاهی به آگرو باکتـریوم ریزوژنز حساس می باشند و تلقیح آنها با این باکتـری منجر به القـای ریشه های مویین می گردد. با استفاده از کشت ریشه های مویین، ممکن است میزان متابولیت های ثانوی...
15 صفحه اولمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
نوع سند: پایان نامه
وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه بوعلی سینا - دانشکده علوم کشاورزی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023